В начало

Определение пигментов растений колориметрическим методом (Лабораторная работа)

 

Цель работы: провести сравнительное определение содержания пигментов в листьях различных растений.

 

Одним из наиболее точных и быстрых способов количественной оценки пигментов является определение их концентрации на фотоэлектроколориметре, который позволяет без калибровочных кривых на основании экспериментально полученных данных по оптической плотности известных для каждого пигмента величин молярного или удельного коэффициента поглощения при определённой длине волны рассчитать концентрацию пигментов.

Содержание хлорофиллов a и b и каротиноидов можно определить в исходной вытяжке пигментов без предварительного их разделения. Для этого измеряют оптическую плотность экстракта на фотоэлектроколориметре при двух длинах волн, соответствующих максимумам поглощения хлорофиллов а и b в красной области спектра при длине волны адсорбционного максимума каротиноидов. Предварительно необходимо установить положение максимумов и разбавить экстракт до такой степени, чтобы получить величину оптической плотности (D) в пределах от 0,1 до 0,8 при λmax.665.

 

Оборудование, материалы и реактивы

– фотоколориметр,

– центрифуга,

– торсионные весы,

– фарфоровая ступка с пестиком,

– пробирки на 10 мл с притертой пробкой,

– спирт.

 

Выполнение работы

1. Приготовление вытяжки пигментов. Для этого листья одного яруса необходимо измельчить, отбросить черешки и крупные жилки. Взвесить 40 мг материала и перенести в пробирки. Добавить 10 мл 96 % спирта. Поместить пробирки с содержимым в темное место на двое суток до полного выхода пигментов из навески в раствор.

2. Оптическую плотность экстракта определяют на фотоколориметре при следующих длинах волн (нм):

хлорофилл а – 665, хлорофилл b649, каротиноиды – 470.

3. Расчет содержания пигментов ведется по следующим формулам:

Если определение пигментов производится в этаноле, то пользуются следующими формулами:

Схл а = [(13,95D665−6,88D649V]/m,

Схл b = [(24,96D649−7,32D665V]/m,

Скар = [1000D470·V/m–2,05Схл а–114,8Схл b)]/245,

 

где Схл а , Схл b , Скар – количество хлорофилла a, b и каротиноидов, выраженное в мг/г сырого вещества;

D665, D649 и D470 – оптическая плотность спиртового экстракта пигментов при длинах волн (нм) соответственно 665, 649 и 470;

m – масса взятой навески, мг;

V – объём этанола в пробирке, см3.

 

4. Результаты анализа заносят в таблицу.

 

Таблица. Результаты определения пигментов в растительном материале

№ пробы

Ярус листьев

Повторность

одного яруса

Оптическая

плотность

экстракта пигментов

при длинах волн (нм)

Содержание

пигментов,

мг/г сырого

вещества

665

(хлорофилл а)

649

(хлорофилл b)

470

(каротиноиды)

хлорофилла а

хлорофилла b

каротиноидов

 

 

1

 

 

 

 

 

 

2

 

 

 

 

 

 

3

 

 

 

 

 

 

Среднее

 

 

 

 

 

 

 

5. Сделать выводы по результатам измерений.

 


Разблокировка Huawei E3272
Разблокировка Huawei E3272


95 VISA VIRTUAL (RUS BANK)
95 VISA VIRTUAL (RUS BANK)


Разблокировка Oysters Arctic 450
Разблокировка Oysters Arctic 450